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色譜柱的清洗和再生方法

點擊次數(shù):3342      更新時間:2013-03-06

 

  除非特殊說明,在所有情況下,所用溶劑的體積應該是色譜柱體積的40-60倍。
  應在清洗過程開始和結(jié)束時各測一次柱效和容量因子等,比較色譜柱性能的改善,以確定清洗的效果。
  確保色譜柱中沒有樣品和緩沖溶液,清洗前所用的溶劑應與zui初清洗時所用的溶劑相溶。
  應確保實驗測試時所用的流動相與色譜柱中zui后的溶劑相溶。
1正相填料
  用四氫呋喃沖洗。
  用甲醇沖洗。
  用四氫呋喃沖洗。
  二氯甲烷沖洗。
  用無苯正己烷沖洗。
2反相填料
  用HPLC級水沖洗,沖洗時進4等份的200μl的二甲亞砜(DMSO)。
  用甲醇沖洗。
  用氯仿沖洗。
  用甲醇沖洗。
3陰離子交換填料
  用HPLC級水沖洗。
  用甲醇沖洗。
  用氯仿沖洗。
4 陽離子交換填料
  用 HPLC 級水沖洗;在沖洗的過程中進4 等份200μl 的DMSO
  四氫呋喃沖洗。
5 蛋白質(zhì)凝膠過濾填料
  去除蛋白質(zhì)尺寸排阻介質(zhì)中的污染物有兩種清洗/再生的方法。
  弱保留蛋白質(zhì)
  用30moL/L pH3.0 磷酸鹽緩沖液沖洗。
  強保留蛋白質(zhì)
  用100%的水到100%的乙腈梯度洗脫60min。
6多孔石墨化碳
  多孔石墨碳有四種再生的方法,選用哪一種方法依賴于被分析物和所用的溶劑。
  酸堿再生
  適合于使用極性流動相分析離子類分析物。
  將色譜柱倒裝
  用50ml含0.1%三F乙酸的四氫呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速沖冼。
  用50ml含0.1%三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速沖冼。
  用50ml含0.1%三F乙酸的四氫呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速沖冼。
  用95%甲醇水溶液沖洗重新平衡。
  將色譜柱改為正向。
        作者:英國的R.Plumb-Glaxo
  強有機溶劑再生
  適合于水相分析極性或離子類分析物。
  用50ml丙酮以1ml/min流速沖洗。
  用120ml二丁醚以1ml/min流速沖洗。
  用50ml丙酮以1ml/min流速沖洗。
  用水沖冼至平衡。
  正相再生
  適合于主要使用正相流動相的多孔石墨化碳柱。
  用50ml二氯甲烷以1ml/min流速沖洗。
  用50ml甲醇以1ml/min流速沖洗。
  用50ml水以1ml/min流速沖洗。
  用50ml 0.1mol/L鹽酸以1ml/min流速沖洗。
  用50ml水以流速1ml/min沖洗。
  用50ml甲醇以1ml/min流速沖洗。
  用50ml二氯甲烷以1ml/min流速沖洗。
  用流動相沖冼至平衡。
       作者:瑞典的A.Karlsson-Uppsala
  三F乙酸的去除
  適合于流動相中含有三F乙酸的多孔石墨化碳柱。
  用加熱到75℃的乙腈沖洗,同時色譜柱也要保持在這一溫度。
7 帶金屬抗衡離子的聚合物填料
  基質(zhì)是帶金屬抗衡離子的聚合物色譜柱,有三種再生方法,每種方法詳細列于下表:
 

色譜柱類型
金屬污染物
有機污染物
色譜柱清冼
氫離子型
用25℃的0.1mol/L的H2SO4溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時
用65℃的20:80的ACN:0.01NH2SO4溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時
鈣離子型
用25℃的0.1mol/L pH6.3的Ca(NO3)2溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時
鈉離子型
用85℃的0.1mol/L 的NaNO3溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反相沖冼4小時
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時
銀離子型
沒有再生過程的報導。
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時
鉛離子型
用85℃的pH 5.3的0.1M Pb(NO3)2溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4

 

 

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